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1993年被选中主演电影《刘海粟》，那是她的第一次触电经历，收获800元片酬。
1996年与保剑峰、陈龙、高曙光、张雅琳共同出演了电视剧《真空爱情记录》，讲述了一群大学毕业生为了工作和爱情奋斗的故事，该剧在当时收获了一定的收视率。
1998年毕业于上海戏剧学院，毕业后参演了第一部改编自陕西驻沪作家李春平同名小说的电影《玻璃是透明的》，马伊琍饰演小丫子，出演的第一部古装电影《孔乙己》至今没有公映。
2000年出演了《黑洞》饰演演三陪女，马伊琍的表演事业得到了更好的提升，在电视剧《前世今生》中饰演美貌且气质超凡的秦婉莹。
2001年出演电视剧《白天睡觉的女人》饰演李秀，在电影《西施眼》中饰演施雨，该剧在2002年美国夏威夷国际电影节中获评审团大将及亚洲最佳电影。
2002年因出演电视剧《还珠格格Ⅲ之天上人间》中紫薇一角而被大众所熟知，虽有一些争议，但凭此成为了家喻户晓的女星。2004年出演了由黄磊指导的《天一生水》饰演一个混血姑娘明妮。
2003年在《还珠第三部天上人间》中饰演夏紫薇，成为继林心如后的第二代紫薇。
2005年出演张黎导演的电视剧《锦衣卫》在剧中就出演了一个这样的倾国美人客印月，这个女人从某中角度带动了整个剧情的推动，也是将几个男性角色之间的关系串联起来的一个重要点。
2006年，其参演的《乔家大院》在央视热播，扮演的江雪瑛而收获了更多的观众和粉丝，2006年因拍摄《奋斗》中的夏琳而名声大噪。她的穿衣风格独特。
2007年，出演由赵宝刚指导的青春励志电视剧《奋斗》而名声骤起，年6月底马伊琍签约了内地影视巨擎橙天娱乐。
2008年因拍电视剧《为谁心动》时无悔剃光了头，凭借影片《江北好人》，马伊琍战胜了李冰冰、范冰冰两位大热候选人，成为了长春电影节影后。2009年与佟大为共同出演了电视剧《婚姻保卫战》演出夫妻间事。
2010年与涂松岩领衔主演的都市题材电视剧《双城生活》真实反映的双城恋话题，让许多观众产生了不小共鸣并引发了网络热议，而马伊琍在剧中塑造的北京大妞郝京妮，更是受到了网友的普遍好评。
2009年马伊琍出演了首部反映豫商故事的年代戏《经纬天地》在CCTV-8首播，这也是她继《乔家大院》之后首次登陆央视，马伊琍扮演尚达志的妻子顺儿，这也是其生产复出首部电视剧作。
2011国剧盛典获2011年度最佳女演员。2013年年初马伊琍与杜淳、刘莉莉、陈思斯等众多明星合作的大戏《青春期撞上更年期2》，此外，还客串电影《不二神探》，并且彻底颠覆以往的形象痛骂文章，成为了影片一大看点。
2012年年末，马伊琍出席各大卫视跨年晚会。2013年，首当制片人的马伊琍与首次当导演的丈夫文章合作的电视剧《小爸爸》。
个人生活
登记结婚
2008年，相差8岁的马伊琍和文章这对姐弟恋结婚，与众多明星奢华婚礼不同，马伊琍和文章的结合只是一起领了证。
2012年，10月份爆料称马伊琍怀孕，被目击马伊琍素颜现身北京某妇产医院，独自等候B超检查，疑似再度怀孕。2013年8月25日晚，某周刊微博爆料称马伊俐再怀二胎。
出轨风波
2014年3月28日，有媒体拍到了文章和姚笛在一起的照片。
2014年3月31日凌晨，文章通过新浪微博发布声明诚恳道歉，称咎由自取 ，承认与姚笛的婚外情，并表示辜负了家庭，辜负了丈夫和父亲的称呼。同一时间，马伊琍也发微博回应道恋爱虽易，婚姻不易，且行且珍惜，暗示两人暂不会离婚。
2014年3月31日晚，最先预告文章出轨新闻的《南都娱乐周刊》执行主编谢晓通过微访谈在线与网友交流了他们追踪报道文章婚外情的幕后情况。
2014年4月1日下午，马伊琍的父亲以伊琍爸爸为名开通新浪微博，致信《南都娱乐周刊》的领导陈朝华以及谢 晓，他称此事对家庭打击甚大，但他认为只要文章可以悔过自新、重新做人，主动回归家庭就够了，我女儿可以接受他，日子还得照常过。同时表态文章就是 我们的儿子，儿女犯了错，父母愿意教他们改，表明马伊琍和文章不会离婚，文章已获得他们一家的原谅。
夏威夷度假
2014年7月1日，媒体报道文章和马伊琍夫妻两人在夏威夷度假。
再次求婚
2015年6月29日，马伊琍的生日，文章为自己的爱妻庆生并再次求婚。夫妻俩现场深情相拥。文章在上海包场为马伊琍举办生日派对，瞒着她请来众多好友给老婆一个巨大惊喜。
文章表示：小文以前不靠谱，今天以后想靠谱了。有你，便是一切。老婆，求求你嫁给我。 人物作品
参演电视剧
参演电影
音乐作品
拍摄杂志
2011-11 第3届英国万像国际华语电影节最佳女配角奖 追踪孔令学 （获奖）
2011-03 第一届亚洲电视彩虹奖最佳女喜剧演员奖 婚姻保卫战 （获奖）
2009-08 第12届中国电影表演艺术学会金凤凰奖学会奖 江北好人 （获奖）
2009-00 第2届华鼎奖中国年度影视表现最佳女演员奖 江北好人 （获奖）
2008-07 第9届中国长春电影节最佳女主角奖 江北好人 （获奖）
2008-04 第15届北京大学生电影节最佳女主角奖 江北好人 （提名）
其他荣誉
2012 优品中国文化行大使 （获奖）
2012 星尚大典星尚演绎先锋人物 （获奖）
2011 2011中国最美50人盛典获得温暖之美大奖 （获奖）
2011 中国影响2010·时尚盛典最美‧年度荧屏情侣(马伊琍、佟大为) （获奖）
2010 南方时尚盛典最受公众关注 中国时尚明星 （获奖）
2009 中国国际年度绿色风云人物奖 （获奖）
2008 大爱时尚盛典精品大爱之星奖 （获奖）
2007 CCTV少儿频道欢乐盛典最具奋斗精神奖 （获奖）
2007 第四届 COSMO BEAUTY AWARDS获年度最佳造型奖 （获奖）
2007 《北京青年周刊》BQ红人榜艺术红人奖 （获奖）
2006 腾讯网娱乐中国·2006星光大典最受欢迎四大花旦(与黄奕、李小冉、刘烨) （获奖）
综合荣誉
2013 CCTV 2012中国电视剧年度明星盛典特别突破奖女演员奖 （获奖）
2012 CCTV 2012中国电视剧年度明星盛典特别突破奖女演员奖 （获奖）
2011 爱奇艺2012年度盛典年度最佳电视剧女演员 （获奖）
2011 优酷影视指数盛典开年优酷指数最佳女演员奖 （获奖）
2011 国剧盛典年度最佳女主角 双城生活 （获奖）
2011 大剧盛典获得开年网络指数最佳女演员奖 （获奖）
2010 《申江服务导报》-永华电影盛宴年度影视剧红人女演员 （获奖）
2010 《北京青年周刊》BQ红人榜年度人气女演员奖 （获奖）
2010 腾讯星光大典获年度电视女演员 （获奖）
2009 2008风尚权利榜最受欢迎女演员奖 （获奖）
人物评价 因为马伊俐出道比较早，再加上《奋斗》里夏琳的角色深入人心，外人总觉得她是个强悍的大女人。而婚后接着产后的马伊俐，认为自己越来越居里夫人了（腾讯网评） 这个角色让马伊琍充分展示了极宽的戏路（赵宝刚评）
